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RNA甲基化检测

   作者:管理   发布时间:2022-06-23 16:52:28

RNA上修饰的种类很多,包括甲基化、羟甲基化、乙酰化等。m6ARNA上最丰富的一种修饰,平均每条转录本有1~3m6A修饰。m6A存在于大多数真核生物(包括哺乳动物、昆虫、植物和酵母)和一些病毒的mRNA中,也存在于tRNArRNA、小核RNAsmall nuclear RNAsnRNA)以及一些长链非编码RNALong non-coding RNAlncRNA)。m6A甲基化(N6-methyladenosine)是指RNA分子在RNA甲基化转移酶复合体(MTC)的作用下将甲基选择性地添加到特定腺嘌呤碱基上的过程。

1m6A RNA甲基化定量检测试剂盒

m6A RNA甲基化定量检测试剂盒(比色法),可以通过比色的方法定量RNAN6-甲基腺嘌呤(m6A)。它可以直接检测哺乳动物、植物、真菌细菌和病毒的总RNA样本的m6A的甲基化程度。

2m6A甲基酶活性/抑制分析试剂盒

用于基于吸光度的核提取物或纯化酶中总m6A去甲基酶活性/抑制的测量,关键点:1、检测多种物种中的m6A RNA去甲基化酶活性/抑制分析检测(哺乳动物、植物、真菌和细菌);2、使用m6A抗体的比色ELISA样测定;3、检出限低至2 μg 核提取物和50 ng纯化的酶。

3RNA甲基化测序(MeRIP

MeRIP-Seq methylated RNA immunoprecipitation sequencing)结合RNA-蛋白免疫共沉淀和高通量测序技术,可实现全转录组水平上RNA甲基化分析。由于甲基化修饰约占所有RNA修饰的60%以上,而N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosinem6A),作为最常见的一种转录后修饰,介导了超过80%RNA甲基化。基于MeRIP-Seq分析RNA甲基化模式,加速了癌症发生和转移、胚胎发育、脂类代谢、环状RNA翻译和DNA损伤修复等生物学功能和作用机制的研究。锐博生物利用单克隆抗体抓取存在m6A修饰的RNA片段,结合高通量测序,实现转录组学范围内的m6A peak检测与motif分析。

4Dot blotting

使用Dot blotting检测mRNAm6A甲基化总体水平的方法相对简单、快速且成本较低。第一步是总RNA的提取。第二步Dot blotting,将2 μlmRNA直接转移至经核酸优化的尼龙薄膜上。用抗m6A的抗体孵育薄膜。用二抗在室温下孵育尼龙薄膜。在黑暗室温下,用超薄膜ECL进行曝光,以获得适当的曝光时间,最后显影观察。

5MeRIP-qPCR

MeRIP-qPCRm6A-IP-qPCR,即利用m6A抗体在富集到带甲基化修饰的RNA后,下一步使用qPCR直接对富集到的RNA进行定量的一种技术。这种技术可以做到对发生甲基化的RNA进行相对定量,是一种低成本的检测方法,仅需m6A抗体,A/G免疫磁珠,磁力架和qPCR仪及配套试剂盒即可开展这类实验。

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