采用Oligo 6和Primer Premier 5.0进行引物设计。引物设计主要参考以下原则：

1）引物最好在模板cDNA的保守区内设计。

2）引物长度一般在15-30碱基之间。

3）G+C含量：应在40%-60%之间，PCR扩增中的复性温度一般较Tm值低等于引物的Tm值减去5-10°C。引物长度小于20 bp时，其Tm恒等于4×（G+C）+2×（(A+T）

4）引物3’端要避开密码子的第3位。

5）引物3’端不能选择A，最好选择T。

6）碱基要随机分布。

7）引物自身及引物之间不应存在互补序列。

8）引物的5’端可以修饰，而3’端不可修饰。

9）扩增产物的单链不能形成二级结构。

10）引物应具有特异性。